俄罗斯XXXXXBBBBB


    EN

    技術專欄

    Westernblot實驗蛋白提取
    供稿:科鹿生物發布時間:2021-08-14瀏覽量:84次

    貼壁細胞總蛋白提?。?/p>

    用TBS緩沖液潤洗貼壁細胞2-3次,最后一次盡量吸干殘留液。加入適當體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑)于培養板/瓶內裂解3-5min。期間反復晃動培養板/瓶,使試劑與細胞充分接觸。用細胞刮刀將細胞及試劑刮下,收集到1.5mL離心管中。冰浴30min,期間用移液器反復吹打,確保細胞完全裂解。4℃13000g離心5min,收集上清,即為總蛋白溶液。

    懸浮細胞總蛋白提?。?/p>

    低速離心收集細胞,加入適當體積的冷卻的PBS緩沖液重懸,2000rpm離心10min,吸除上清。重復以上操作兩次,收集細胞沉淀。加入適當體積的細胞總蛋白提取試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑),振蕩。冰浴30min,期間用移液器反復吹打,確保細胞完全裂解。4℃13000g離心5min,收集上清,即為總蛋白溶液。

    組織總蛋白提?。?/p>

    組織塊用預冷的PBS緩沖液漂洗2-3次,去除血污,剪成小塊置于勻漿器中。加入10倍于組織體積的組織蛋白提取試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑),冰浴徹底勻漿。將勻漿液轉移至離心管中,振蕩。冰浴30min,期間用移液器反復吹打,確保勻漿液完全裂解。4℃13000g離心5min,收集上清,即為總蛋白溶液。

    胞漿胞核蛋白提?。?/p>

    收集細胞,將細胞重懸于適當體積的漿蛋白提取試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑)中,振蕩混勻15 秒,使細胞完全懸浮并分散開。如果細胞沉淀沒有完全懸浮并分散開,可以適當延長振蕩混勻時間。冰浴30 min。高速振蕩混勻5 秒,4℃13000g 離心10 min。吸取上清至一預冷的離心管中,即為細胞漿蛋白。吸盡上清(上清盡量去凈,避免漿蛋白污染),加入適當體積的核蛋白提取試劑(使用前數分鐘內加入蛋白酶抑制劑),高速振蕩混勻15 秒,使沉淀完全懸浮并分散開。冰浴30min,每隔5min劇烈振蕩混勻10~20s, 4℃13000g離心10 min。吸取上清至一預冷的離心管中,即為細胞核蛋白。

    俄罗斯XXXXXBBBBB